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裂解緩沖液：為了準(zhǔn)備在凝膠上運(yùn)行的樣品，需要裂解細(xì)胞和組織以釋放感興趣的蛋白質(zhì)。這會(huì)溶解蛋白質(zhì)，使它們可以單獨(dú)遷移通過分離凝膠。我們使用RIPA緩沖液(beyotimeP0013B)來提取全細(xì)胞提取物和膜結(jié)合蛋白。蛋白酶和磷酸酶抑制劑：一旦發(fā)生裂解，蛋白水解、去磷酸化和變性就開始。如果樣品始終保存在冰上或4°C下，并且將適當(dāng)?shù)囊种苿┬迈r添加到裂解緩沖液中，這些事件可以大大減慢。Pmsf是我們經(jīng)常使用的蛋白酶抑制劑。組織裂解液的制備用干凈的工具解剖感興趣的組織，最好在冰上，并盡...

抗體驗(yàn)證是關(guān)鍵！以下是應(yīng)對(duì)您的抗體執(zhí)行的最基本的驗(yàn)證步驟：肽產(chǎn)生的抗體-免疫原驗(yàn)證將肽序列與UniProt數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì)，看看它是否僅與其目標(biāo)具有同一性。肽序列與免疫原的蛋白質(zhì)序列之間的同一性為85%或更高的任何蛋白質(zhì)都可以被該抗體檢測(cè)到。不幸的是，確切的肽序列并不總是可用，但肽序列周圍的氨基酸范圍應(yīng)該是可用的。炸毀該地區(qū)也有幫助。所有Biorbyt的免疫原都會(huì)被傳輸回UniProt數(shù)據(jù)庫，以確保它們僅檢測(cè)到其設(shè)計(jì)針對(duì)的蛋白質(zhì)。抗體的應(yīng)用驗(yàn)證如果一種抗體據(jù)稱適用于蛋白質(zhì)印跡(...

對(duì)于細(xì)胞學(xué)染色，您實(shí)際上是在三種蘇木精染色之一之間進(jìn)行選擇：Gill1X蘇木精、Gill2X蘇木精和Harris蘇木精，酸化。以下是您如何為細(xì)胞學(xué)染色選擇最佳蘇木精，以及實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員選擇的兩種最常見染色的方案。識(shí)別細(xì)胞學(xué)標(biāo)本中的癌細(xì)胞、感染、炎癥或其他細(xì)胞異常一般來說，漸進(jìn)式吉爾蘇木精適合評(píng)估細(xì)胞學(xué)標(biāo)本。最常見的是，我們推薦Gill1X，因?yàn)樗徽J(rèn)為是Gill蘇木精染色劑中最淺的染色劑。它可以補(bǔ)充OG和EA染色，而不會(huì)過度染色標(biāo)本。有時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)Gill2X蘇木精（例如當(dāng)您...

分子克隆是分子生物學(xué)中用于組裝重組DNA分子的一組實(shí)驗(yàn)方法。基于質(zhì)粒的克隆包括4個(gè)主要步驟：插入DNA制備載體DNA制備插入片段與載體的連接轉(zhuǎn)化為感受態(tài)細(xì)胞在下面的示例中，我們將描述如何使用SgfI和MluI將目標(biāo)插入片段亞克隆到載體中。插入DNA制備對(duì)含有插入片段的載體進(jìn)行限制性消化用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶消化含有插入片段的載體DNA。對(duì)于我們的示例，使用的限制性位點(diǎn)是SgfI和MluI位點(diǎn)。OriGene擁有全基因組cDNA表達(dá)載體。在瓊脂糖凝膠上運(yùn)行消化的插入DNA以檢查大...

蛋白質(zhì)印跡是研究實(shí)驗(yàn)室普遍使用的一種技術(shù)，用于研究感興趣的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)印跡用于抗體驗(yàn)證、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用研究以及許多其他應(yīng)用。1然而，生成可解釋的蛋白質(zhì)印跡結(jié)果可能具有挑戰(zhàn)性。以下是一些常見問題以及解決方法。高背景可能是由于嘗試這個(gè)高抗體濃度使用一抗和二抗進(jìn)行滴定。包括已知的蛋白質(zhì)對(duì)照。封閉液使用新鮮的封閉液，增加封閉時(shí)間/溫度，嘗試不同的封閉劑。印跡在封閉/洗滌過程中干燥確保膜在封閉和清洗步驟中被充分覆蓋。洗得不夠增加洗滌次數(shù)和洗滌液體積。確保至少洗滌3次，每次5分...

GreenqPCRMastermixHighROX針對(duì)塊循環(huán)儀中的qPCR（實(shí)時(shí)）PCR進(jìn)行了優(yōu)化，特別是來自AppliedBiosystems設(shè)備。含有500nMROX的GreenqPCR主混合物包含嵌入熒光染料和執(zhí)行定量PCR所需的最佳量的所有必需成分。GenaxxonGreenMasterMix中使用的化學(xué)修飾SuperHotTaq聚合酶的優(yōu)點(diǎn)：用于室溫設(shè)置的熱啟動(dòng)技術(shù)無需在冰上移液無需立即進(jìn)一步處理(PCR)。移液的PCR混合物可在室溫下保存最多3天。還可以擴(kuò)增富含G...